外科学论文_HIF-1α基因修饰的干细胞粘附胶原 - 上海公安高等专科学校学报杂志社投稿

一、来稿必须是作者独立取得的原创性学术研究成果，来稿的文字复制比（相似度或重复率）必须低于用稿标准，引用部分文字的要在参考文献中注明；署名和作者单位无误，未曾以任何形式用任何文种在国内外公开发表过；未一稿多投。二、来稿除文中特别加以标注和致谢之外，不侵犯任何版权或损害第三方的任何其他权利。如果20天后未收到本刊的录用通知，可自行处理(双方另有约定的除外)。三、来稿经审阅通过，编辑部会将修改意见反馈给您，您应在收到通知7天内提交修改稿。作者享有引用和复制该文的权利及著作权法的其它权利。四、一般来说，4500字（电脑WORD统计，图表另计）以下的文章，不能说清问题，很难保证学术质量，本刊恕不受理。五、论文格式及要素：标题、作者、工作单位全称(院系处室)、摘要、关键词、正文、注释、参考文献(遵从国家标准：GB\T7714-2005，点击查看参考文献格式示例)、作者简介(100字内)、联系方式(通信地址、邮编、电话、电子信箱)。六、处理流程：（1）通过电子邮件将稿件发到我刊唯一投稿信箱（2）我刊初审周期为2－3个工作日，请在投稿3天后查看您的邮箱，收阅我们的审稿回复或用稿通知；若30天内没有收到我们的回复，稿件可自行处理。（3）按用稿通知上的要求办理相关手续后，稿件将进入出版程序。（4）杂志出刊后，我们会按照您提供的地址免费奉寄样刊。七、凡向文教资料杂志社投稿者均被视为接受如下声明：（1）稿件必须是作者本人独立完成的，属原创作品（包括翻译），杜绝抄袭行为，严禁学术腐败现象，严格学术不端检测，如发现系抄袭作品并由此引起的一切责任均由作者本人承担，本刊不承担任何民事连带责任。（2）本刊发表的所有文章，除另有说明外，只代表作者本人的观点，不代表本刊观点。由此引发的任何纠纷和争议本刊不受任何牵连。（3）本刊拥有自主编辑权，但仅限于不违背作者原意的技术性调整。如必须进行重大改动的，编辑部有义务告知作者，或由作者授权编辑修改，或提出意见由作者自己修改。（4）作品在《文教资料》发表后，作者同意其电子版同时发布在文教资料杂志社官方网上。（5）作者同意将其拥有的对其论文的汇编权、翻译权、印刷版和电子版的复制权、网络传播权、发行权等权利在世界范围内无限期转让给《文教资料》杂志社。本刊在与国内外文献数据库或检索系统进行交流合作时，不再征询作者意见，并且不再支付稿酬。九、特别欢迎用电子文档投稿，或邮寄编辑部,勿邮寄私人，以免延误稿件处理时间。

外科学论文_HIF-1α基因修饰的干细胞粘附胶原

作者:

关键词:

摘要：

文章目录

缩略语表

中文摘要

ABSTRACT

前言

1.研究背景及意义

1.1 外伤性颅脑创伤

1.2 干细胞移植治疗

1.3 脱细胞支架

1.4 缺氧诱导因子

文献回顾

1.国内外研究进展

1.1 创伤性颅脑损伤的研究进展

1.2 干细胞治疗研究进展

1.3 缺氧诱导因子研究进展

1.4 脱细胞生物支架研究进展

1.材料

1.1 实验质粒

1.2 实验脐带

1.3 实验动物

1.4 实验试剂

1.5 实验仪器

1.6 实验试剂的配置

2.方法

2.1 质粒提取

2.2 质粒的测序

2.3 琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒的构建

2.4 人脐带间充质干细胞培养

2.4.1 人脐带间充质干细胞原代细胞培养

2.4.2 人脐带间充质干细胞传代

2.4.3 人脐带间充质干细胞冻存

2.4.4 人脐带间充质干细胞复苏

2.5 人脐带间充质干细胞鉴定

2.6 HIF-1α基因转染人脐带间充质干细胞

2.7 蛋白印迹法检测HIF-1α蛋白在人脐带间充质干细胞的表达

2.7.1 细胞蛋白样品提取步骤

2.7.2 聚丙烯酰胺凝胶配制步骤

2.7.3 蛋白质电泳步骤

2.8 脱细胞脑支架制作

2.9 正常脑组织和脱细胞脑组织石蜡切片

2.10 正常脑组织与脱细胞脑组织石蜡切片苏木精伊红染色和免疫组化染色

2.10.1 正常脑组织与脱细胞脑组织石蜡切片苏木精伊红染色

2.10.2 正常脑组织与脱细胞脑组织免疫组化染色

2.11 动物脑创伤模型的建立

2.12 实验动物及分组

2.13 细胞移植

2.14 神经功能检测

2.15 蛋白质印迹法检测环磷腺苷效应元件结合蛋白基因在外伤性脑创伤中的表达

2.15.1 脑组织蛋白提取

2.15.2 蛋白质印迹法检测环磷腺苷效应元件结合蛋白基因在外伤性脑创伤中的表达

2.16 统计分析方法

3 结果

3.1 HIF-1α质粒提取和测序

3.2 人脐带间充质干细胞分离培养及鉴定

3.2.1 人脐带间充质干细胞分离培养

3.2.2 人脐带间充质干细胞传代培养

3.3 人脐带间充质干细胞免疫荧光化学染色鉴定

3.4 缺氧诱导因子基因在人脐带间充质干细胞表达的鉴定

3.5 大鼠正常脑组织与脱细胞脑组织切片苏木精伊红染色结果

3.6 大鼠正常脑组织与脱细胞脑组织切片免疫组化染色结果

3.7 行为学评分

3.8 蛋白印迹法检测环磷腺苷效应元件结合蛋白在脑组织中的表达

4 讨论

4.1 胶原支架与干细胞移植

4.2 HIF-1α基因转染人脐带间充质干细胞

结果与展望

参考文献

个人简历和研究成果

个人简历

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

文章摘要:目的:利用改良自由落体Feeney法构建SD大鼠外伤性颅脑损伤（Traumatic brain injury,TBI）模型,探讨HIF-1α基因修饰的脐带间充质干细胞（Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,UCMSCs）与细胞外基质（Extracellular matrix,ECM）复合体移植对大鼠脑创伤后神经修复的影响。方法:将HIF-1α基因转染UCMSCs,通过Western Blot鉴定HIF-1α基因在UCMSCs中的表达;采用化学提取法取得的ECM,通过苏木精-伊红（Hematoxylin–Eosin,HE）染色鉴定细胞去除情况,免疫组化染色证明胶原蛋白保留情况;选取30只体重在220-260g SD雄性大鼠,通过Feeney法建立大鼠中度TBI模型,随机分为5组（各组6只）:A组脑创伤区移植生理盐水,B组脑创伤区移植UCMSCs,C组脑创伤区移植ECM,D组脑创伤区移植HIF-1α基因修饰的UCMSCs,E组脑创伤区移植HIF-1α基因修饰的UCMSCs与脱细胞脑支架复合体,术后1天进行移植,分别在脑创伤后1天、脑创伤后7天、脑创伤后14天和脑创伤后28天对不同实验组大鼠进行改良的神经功能缺损评分（mNSS,modified Neurological Severity Scores）,并鉴定环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB,cAMP-response element binding protein）基因表达。结果:组织块培养法获取UCMSCs,形态学观察呈纤维样细胞。免疫荧光检测细胞表型CD105阳性,符合MSCs表面标记;Western Blot证实采用脂质体Lipofectamine2000转染的UCMSCs中,HIF-1α蛋白表达明显增加;采取化学提取法取得的脱细胞凝胶支架经苏木精-伊红染色证实细胞明显去除,免疫组化证实胶原蛋白得到保留;在细胞移植治疗大鼠TBI模型2周开始,HIF-1α-UCMSCs组行为学评分均比对照组行为学评分明显降低（P<0.05）;UCMSCs组、ECM组与生理盐水组相比CREB蛋白表达明显增多（P<0.05）;HIF-1α-UCMSCs组与UCMSCs组相比CREB蛋白表达明显增多（P<0.05）;HIF-1α-UCMSCs+ECM组与UCMSCs组、ECM组、HIF-1α-UCMSCs组相比CREB蛋白表达明显增多（P<0.05）。结论:对于中度TBI损伤大鼠单一的UCMSCs、ECM、HIF-1α-UCMSCs都可以不同程度的修复TBI后神经损伤;而将UCMSCs、HIF-1α,ECM三者结合到一起治疗比单一治疗效果更显著。

文章来源：《上海公安高等专科学校学报》网址: http://www.shgagdzkxxxb.cn/qikandaodu/2021/1110/911.html